Test fonctionnel de mesure des activités enzymatiques de réparation de l'ADN par excision resynthèse sur support miniaturisé : mise au point et applications - TEL - Thèses en ligne Accéder directement au contenu
Thèse Année : 2006

Miniaturized functionnal assay for enzymatic excision resynthesis DNA repair activities measurement : setup and applications

Test fonctionnel de mesure des activités enzymatiques de réparation de l'ADN par excision resynthèse sur support miniaturisé : mise au point et applications

Résumé

DNA repair is a very important cellular mechanism involved in various genetic diseases and in carcinogenesis. DNA repair systems exhibit complementarities and interactions recently highlighted. However, this complexity is not taken into account by functional assays available nowadays.
Therefore we have designed a miniaturized in vitro assay allowing specific, functional and parallelized measurement of DNA repair activities. This test is an adaptation of an excision resynthesis assay to the microarray format.
We first setup and optimized the microarray fabrication, the data analysis and normalization, and the repair reaction. We then validated the assay and demonstrated that DNA repair activities measured were specific. Finally we demonstrated the potential of the assay in two different domains. We first phenotyped different cell types: the results showed the similarity of human fibroblasts repair profiles, and also the different repair abilities existing between fibroblast, keratinocyte, and peripheral blood mononuclear cells. Moreover we studied adaptation of cells to gamma irradiation. We demonstrated that DNA repair activities are involved in the radio-adaptation of cells .
Potential applications of this assay could be important in fundamental research as in applied one such as molecular screening, and in diagnosis.
La réparation de l'ADN est un processus cellulaire très important comme le montre son implication dans de nombreuses maladies génétiques et la carcinogenèse. Les mécanismes des différents systèmes de réparation présentent des interactions et des complémentarités. Les tests fonctionnels utilisés jusqu'alors pour étudier les activités de réparation ne prennent pas en compte toute cette complexité.
Nous avons développé un test in vitro offrant une mesure parallélisée, fonctionnelle et spécifique d'activités enzymatiques de réparation de l'ADN. Pour ce faire, nous avons adapté un test d'excision resynthèse au format biopuce.
Nous avons mis au point les différentes étapes du test : la fabrication de la biopuce, la normalisation et l'analyse des données, les conditions de réactions biologiques. Nous avons ensuite validé le test en démontrant que nous mesurions des activités enzymatiques de réparation. Enfin deux expériences applicatives de ce test ont été réalisées. Nous avons tout d'abord mis en évidence la similitude des profils de réparation de trois souches de fibroblastes humains issus de cultures primaires, mais aussi les différences des capacités de réparation qu'il existe entre les fibroblastes, kératinocytes, et cellules mononuclées du sang périphérique. Par la suite, nous avons démontré que la réparation de l'ADN est impliquée dans la réponse adaptative des cellules au rayonnement ionisant.
Les applications futures de ce test sont importantes, tant en recherche fondamentale qu'appliquée pour le criblage de molécules, ou encore dans le domaine diagnostic.
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Dates et versions

tel-00126858 , version 1 (26-01-2007)

Identifiants

  • HAL Id : tel-00126858 , version 1

Citer

Jean-François Millau. Test fonctionnel de mesure des activités enzymatiques de réparation de l'ADN par excision resynthèse sur support miniaturisé : mise au point et applications. Biochimie [q-bio.BM]. Université Joseph-Fourier - Grenoble I, 2006. Français. ⟨NNT : ⟩. ⟨tel-00126858⟩
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