Développement de systèmes membranaires modèles pour la vacuole parasitophore de Toxoplasma gondii :<br />Interactions des protéines de granules denses (protéines GRA) avec des vésicules unilamellaires - TEL - Thèses en ligne Accéder directement au contenu
Thèse Année : 2007

Developement of model membranes to mimick the parasitophorous vacuole of Toxoplasma gondii: Interactions of dense granule proteins (GRA proteins) with unilamellar vesicles

Développement de systèmes membranaires modèles pour la vacuole parasitophore de Toxoplasma gondii :
Interactions des protéines de granules denses (protéines GRA) avec des vésicules unilamellaires

Résumé

GRA proteins are secreted by the intracellular parasite Toxoplasma gondii into the parasitophorous vacuole, where most of them interact with two systems of tubular membranes : the Host Organelle Sequestering Tubules (HOSTs) and the Membrane Nanotubules Network (RNM). Although most of the GRA proteins contain potential transmembrane domains, they are secreted as soluble forms and become membrane-associated only when they reach their target membranes. This unusual property led to consider them as attractive models of protein-membrane interactions. I developed two experimental approaches to study the interactions of GRA proteins, extracted from the parasite or from the vacuole, with model membranes. Firstly, biochemical approaches using Small Unilamellar Vesicles (SUVs) led to characterize the solubilisation forms of GRA proteins and their association with SUVs membranes. Secondly, I developed a Giant Unilamellar Vesicles (GUVs) model to study the interactions of GRA proteins with membranes by fluorescence spectroscopy methods. The results provide elements 1) which help to decipher the traffic of GRA proteins within the parasite and the PV, and 2) which open the way to set up an in vitro minimal system to study the building up of the parasitophorous vacuole and of its associated tubular membranes.
Les protéines GRA sont sécrétées par le parasite intracellulaire Toxoplasma gondii dans la vacuole parasitophore, où elles interagissent pour la plupart avec deux systèmes de membranes tubulaires : les tubules séquestrant des organites de l'hôte (HOSTs) et le réseau de nanotubes membranaires (RNM). Bien que la plupart des protéines GRA contiennent des domaines transmembranaires potentiels, elles sont sécrétées sous des formes solubles et ne s'associent à des membranes qu'une fois qu'elles ont atteint leurs membranes-cibles dans la vacuole. Cette propriété inhabituelle nous a amenés à les considérer comme des modèles intéressants pour l'étude d'interactions protéinemembrane. J'ai développé deux approches expérimentales pour étudier les interactions des protéines GRA, extraites du parasite ou de la vacuole, avec des membranes-modèles. Premièrement, des approches biochimiques m'ont amenée à caractériser les formes de solubilisation des protéines GRA et leur association avec les membranes des petites vésicules unilamellaires (SUVs). Deuxièmement, j'ai développé une approche par spectroscopie de fluorescence, de protéines GRA associées aux membranes de vésicules unilamellaires géantes (GUVs). Les résultats fournissent des éléments de réponse qui (1) aident à décrypter le trafic des protéines dans le parasite et dans la vacuole et (2) ouvrent la voie pour la mise en place d'un système in vitro pour l'étude de la maturation de la vacuole parasitophore et de ses membranes tubulaires internes.
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  • HAL Id : tel-00177965 , version 1

Citer

Pauline Ruffiot. Développement de systèmes membranaires modèles pour la vacuole parasitophore de Toxoplasma gondii :
Interactions des protéines de granules denses (protéines GRA) avec des vésicules unilamellaires. Biophysique [physics.bio-ph]. Université Joseph-Fourier - Grenoble I, 2007. Français. ⟨NNT : ⟩. ⟨tel-00177965⟩

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