STRATEGIES D'OMOGENEISATION DES POPULATIONS DE PROGENITEURS NERVEUX FOETAUX HUMAINS DANS UNE PERSPECTIVE DE THERAPIE CELLULAIRE DU SYSTEME NERVEUX CENTRAL - TEL - Thèses en ligne Accéder directement au contenu
Thèse Année : 2007

STRATEGIES D'OMOGENEISATION DES POPULATIONS DE PROGENITEURS NERVEUX FOETAUX HUMAINS DANS UNE PERSPECTIVE DE THERAPIE CELLULAIRE DU SYSTEME NERVEUX CENTRAL

Résumé

In a therapeutic purpose, human fetal neural stem cells may be the most suitable tool for the treatment of central nervous system injuries or neurodegenerative disorders. Until now, their use in cell-based therapy has appealed to heterogeneous populations consisting of immature cells, committed progenitors and fully mature cells. However, recent studies have revealed the interest of enriching the populations in a specific cellular type in order to improve graft efficiency. In our study, two different strategies were developed to homogenize human fetal progenitor populations. In the first one, neuronal differentiation was achieved by lentiviral vector-mediated overexpression of 4 proneural genes: Neurogenine 1, 2, 3 and Mash1. In the second one, lentiviral vectors were used to promote reporter protein expression under the control of lineage-specific promoters: the Nestine promoter for immature cells; the human Synapsine promoter for neurons and the GFAP promoter for astrocytes. Although hSYN and GFAP promoters were shown to be non-specific, the Nestine promoter drove GFP-expression in a majority of nestine-positive cells. These two methods should allow a selection of the desired populations. A larger-scale project should now evaluate the advantage of grafting homogeneous populations.
Dans une perspective de médecine régénératrice, les cellules souches nerveuses et progénitrices fœtales humaines constituent indéniablement un des outils les plus adaptés au traitement des lésions du SNC et des maladies neurodégénératives. Jusqu'à présent, leur utilisation en thérapie cellulaire a eu recours à des populations hétérogènes composées à la fois de cellules immatures, de cellules en voie de différenciation et de cellules pleinement différenciées. Or des études récentes ont révélé l'intérêt de disposer de populations enrichies en un type cellulaire donné afin d'améliorer l'efficacité des greffes. Pour homogénéiser les populations et mieux cibler les pathologies, nous avons donc mis en œuvre deux stratégies. La première consiste à surexprimer, dans les cellules en culture, les gènes proneuraux à motif bHLH Ngn1, Ngn2, Ngn3 et Mash1 au travers de vecteurs lentiviraux dits « de différenciation ». Cette surexpression a permis d'orienter la différenciation des cellules majoritairement vers le lignage neuronal et également de spécifier des sous-types neuronaux. La seconde méthode utilise des vecteurs lentiviraux traceurs pour exprimer une protéine rapportrice sous le contrôle de promoteurs spécifiques des différents lignages du SNC en vue de leur sélection par tri cellulaire. Nous avons ainsi utilisé le promoteur Nestine pour les cellules immatures, le promoteur Synapsine pour les cellules neuronales et le promoteur GFAP pour les cellules astrocytaires. Si les promoteurs Synapsine et GFAP ont révélé une spécificité contestable, le promoteur Nestine, quant à lui, a permis de sélectionner une population enrichie à 81% en cellules nestine+. Ce travail s'inscrit dans un projet de plus grande envergure, qui a pour but d'évaluer les bénéfices de greffes de ces populations homogénéisées.
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Dates et versions

tel-00184239 , version 1 (30-10-2007)

Identifiants

  • HAL Id : tel-00184239 , version 1

Citer

Angéline Serre. STRATEGIES D'OMOGENEISATION DES POPULATIONS DE PROGENITEURS NERVEUX FOETAUX HUMAINS DANS UNE PERSPECTIVE DE THERAPIE CELLULAIRE DU SYSTEME NERVEUX CENTRAL. Neurosciences [q-bio.NC]. Université Pierre et Marie Curie - Paris VI, 2007. Français. ⟨NNT : ⟩. ⟨tel-00184239⟩
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