Phénotypage de la réparation de l'ADN de lignées Xeroderma pigmentosum, par un test in vitro multiparamétrique - TEL - Thèses en ligne Accéder directement au contenu
Thèse Année : 2009

Characterization of DNA repair phenotypes of Xeroderma pigmentosum cell lines by a parallelized in vitro test

Phénotypage de la réparation de l'ADN de lignées Xeroderma pigmentosum, par un test in vitro multiparamétrique

Résumé

DNA is constantly damaged modifying the genetic information for which it encodes. Several cellular mechanisms as the Base Excision Repair (BER) and the Nucleotide Excision Repair (NER) allow recovering the right DNA sequence. The Xeroderma pigmentosum is a disease characterised by a deficiency in the NER pathway. The aim of this study was to propose an efficient and fast test for the diagnosis of this disease as an alternative to the currently available UDS test. DNA repair activities of XP cell lines were quantified using in vitro miniaturized and parallelized tests in order to establish DNA repair phenotypes of XPA and XPC deficient cells. The main advantage of the tests used in this study is the simultaneous measurement of excision or excision synthesis (ES) of several lesions by only one cellular extract.
We showed on one hand that the relative ES of the different lesions depend strongly on the protein concentration of the nuclear extract tested. Working at high protein concentration allowed discriminating the XP phenotype versus the control one, whereas it was impossible under a certain concentration's threshold. On the other hand, while the UVB irradiation of control cells stimulated their repair activities, this effect was not observed in XP cells.
This study brings new information on the XPA and XPC protein roles during BER and NER and underlines the complexity of the regulations of DNA repair processes.
L'ADN subit en permanence des agressions modifiant l'information pour laquelle il code. Plusieurs mécanismes, dont la réparation par excision de bases (BER) et la réparation par excision de nucléotides (NER), permettent à la cellule de restaurer la séquence de l'ADN. Le Xeroderma pigmentosum est une maladie caractérisée par une déficience pour la réparation par la voie NER. L'objectif de ce travail était de proposer un test fiable et rapide pour le diagnostic de cette maladie comme alternative au test existant, l'UDS. Les activités de réparation de l'ADN de lignées XP ont été quantifiées à l'aide de tests in vitro miniaturisés et multiparamétriques afin d'établir les phénotypes de réparation de l'ADN de cellules déficientes pour la protéine XPA ou XPC. L'avantage des tests utilisés dans cette étude réside dans la mesure conjointe soit de l'excision soit de l'excision-resynthèse (ER) de plusieurs lésions à partir d'un seul lysat cellulaire.
Nous montrons que l'importance relative de l'ES des différentes lésions dépend fortement de la concentration protéique du lysat nucléaire testé. Ainsi, lorsque la concentration protéique augmente, il devient possible de discriminer le phénotype XP du phénotype témoin, ce qui est impossible en dessous d'une concentration seuil. D'autre part, alors que l'irradiation des cellules témoins aux UVB stimule leurs activités de réparation, cet effet n'est pas observé pour les cellules XP.
Cette étude apporte donc de nouvelles informations quant aux rôles des protéines XPA et XPC lors des mécanismes de réparation BER et NER et souligne la complexité des régulations mises en jeu.
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Dates et versions

tel-00411748 , version 1 (28-08-2009)

Identifiants

  • HAL Id : tel-00411748 , version 1

Citer

Anne-Laure Raffin. Phénotypage de la réparation de l'ADN de lignées Xeroderma pigmentosum, par un test in vitro multiparamétrique. Biologie cellulaire. Université Joseph-Fourier - Grenoble I, 2009. Français. ⟨NNT : ⟩. ⟨tel-00411748⟩
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