Etude du mutant E255L de l'ATPase Ca2+ SERCA1a de lapin et de l'ATPase Ca2+ PfATP6 de Plasmodium falciparum - TEL - Thèses en ligne Accéder directement au contenu
Thèse Année : 2009

Etude du mutant E255L de l'ATPase Ca2+ SERCA1a de lapin et de l'ATPase Ca2+ PfATP6 de Plasmodium falciparum

Résumé

Heterologous expression in yeast (S. cerevisiae), purification, characterization and inhibition assays by artemisinin, a powerful antimalaria The antimalarial drugs artemisinins have been described as inhibitors of the ATPase activity of PfATP6, the only sarcoplasmic/endoplasmic reticulum Ca2+-ATPase (SERCA) of the parasite responsible for malaria, Plasmodium falciparum, after its expression in Xenopus laevis oocytes. Mutation of an amino acid residue in mammalian SERCA1 (E255) to the equivalent one predicted in PfATP6 (L) was reported to induce sensitivity to artemisinin in the oocyte system. However, after purification of PfATP6 and of mammalian SERCA1a E255L expressed in Saccharomyces cerevisiae, it is shown that artemisinins do not inhibit their ATPase activities whereas PfATP6 is somewhat less sensitive to thapsigargin than to rabbit SERCA1 and retains full sensitivity to SERCA1 inhibitors. The insensitivity of purified PfATP6 to artemisinins suggests that the mechanism of action of this class of drugs is complex and cannot be ascribed to direct inhibition of PfATP6. Furthermore, the successful purification of PfATP6 affords the opportunity to develop new antimalarials by screening for inhibitors against PfATP6. Mots clés: PfATP6, ATPase-Ca2+, protéines membranaires, expression hétérologue, purification, artémisinine, paludisme
Le puissant anti-paludéen, l'artémisinine a été décrit comme inhibiteur de l'activité ATPasique de PfATP6 après son expression dans des ovocytes de Xénope. PfATP6 est l'unique ATPase Ca2+ du réticulum endo/sarcoplasmique de P. falciparum, le parasite responsable du paludisme. Quand un acide aminé de SERCA1a de lapin (E255) est muté en son équivalent dans PfATP6 (L), l'activité de ce mutant exprimé en ovocyte de Xénope est inhibée en présence d'artémisinine. Après expression de ce mutant et de PfATP6 dans S. cerevisiae puis leur purification, nous avons constaté qu'aucune de ces deux protéines n'était sensible à l'artémisinine. En parallèle, nous montrons que PfATP6 purifiée est sensible aux principaux inhibiteurs de SERCA mais elle est moins sensible à la thapsigargine que ne l'est SERCA1a. Les résultats présentés ici suggèrent que le méchanisme d'action de l'artémisinine est complexe et ne peut pas être du à une interaction directe entre l'artémisinine et PfATP6. D'autre part, la purification de PfATP6 laisse entrevoir l'opportunité de mieux caractériser cette protéine voire même de développer de nouveaux anti-paludéens en recherchant des inhibiteurs de cette protéine.
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Dates et versions

tel-00447184 , version 1 (14-01-2010)

Identifiants

  • HAL Id : tel-00447184 , version 1

Citer

Delphine Cardi. Etude du mutant E255L de l'ATPase Ca2+ SERCA1a de lapin et de l'ATPase Ca2+ PfATP6 de Plasmodium falciparum. Sciences du Vivant [q-bio]. Université Paris Sud - Paris XI, 2009. Français. ⟨NNT : ⟩. ⟨tel-00447184⟩

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