Interaction du snARN U1 de l'épissage avec l'ARN polymérase II - TEL - Thèses en ligne Accéder directement au contenu
Thèse Année : 2009

U1 snRNA spliceosomal component interaction with RNA polymerase II

Interaction du snARN U1 de l'épissage avec l'ARN polymérase II

Résumé

Non‐coding RNAs are multi‐step genetic expression regulators. Bacterial 6S RNA and murine B2 RNA are non‐coding RNAs able to bind and inhibit RNA polymerase II (RNAPII). Seeking for non‐coding RNAs bound to human RNAPII, immunoprecipitations against RNAPII were carried on mitotic HeLa cells. Co‐immunoprecipitated RNAs were purified and labelled and U1 RNA was found to be peculiarly enriched versus the control IP. This coimmunoprecipitation reflects the association of the U1 snRNP with RNAPII. In order to verify this associtation on an active transcription site, stable cell lines were established with multiple copies insertion of a gene at one single site, allowing its visualisation by FISH (Fluorescent In Situ Hybridization). Two distincts cell lines were made with two similars contructs only differing by three point mutations abolishing the splicing in one construct. Whereas 4 snRNAs were absent on a non splicing transcription site, U1 snRNA is recruited both on spliced and non‐spliced transcription sites. The whole U1snRNP seems to be recruited independently of splicing because of the presence of U1 specific proteins. These results may suggests a role for the RNAPII - U1 snRNP interaction in cotranscriptionnal splicing.
Les ARNs non codants sont des régulateurs de l'expression génétique à plusieurs niveaux. Chez la bactérie et chez la souris, des ARNs non codants (6S et B2) ont la propriété de se lier à l'ARN polymérase et d'inhiber son activité. Afin de déterminer si l'ARN polymérase II (RNAPII) humaine était associée à des ARNs non codants, une immunoprécipitation anti-RNAPII a été réalisée sur des cellules HeLa mitotiques. Les ARNs co-immunoprécipités ont été purifiés et marqués et l'ARN U1 s'est trouvé particulièrement enrichi par rapport au contrôle. Cette co-immunoprécipitation reflète l'association de la snRNP U1 avec la RNAPII. Pour vérifier cette association sur un site de transcription actif, des lignées ont été établies avec l'insertion en multiples copies d'un gène à un site unique, créant ainsi un unique super site de transcription visualisable par FISH (Fluorescence In Situ Hybridization). Deux lignées distinctes ont été créées, l'une avec un gène comportant un intron, l'autre avec le même gène où l'intron comporte trois mutations ponctuelles abolissant l'épissage. Alors que les snARNs U2, U4, U5 et U6 sont absents du site non épissé, l'ARN U1 est enrichi de la même façon indépendamment de l'épissage. La présence des protéines spécifiques de la snRNP U1 indique que la snRNP U1 est recrutée au complet au site de transcription. Ces résultats laissent supposer un rôle pour l'association RNAPII - U1snRNP dans l'épissage cotranscriptionnel.
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Citer

Béatrice Spiluttini. Interaction du snARN U1 de l'épissage avec l'ARN polymérase II. Biologie cellulaire. Université Pierre et Marie Curie - Paris VI, 2009. Français. ⟨NNT : 2009PA066109⟩. ⟨tel-00814598⟩
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