Etude par mutagenèse dirigée de la topologie des sites actifs et des spécificités de substrats des cytochromes P450 2C9 et 2C8 humains - TEL - Thèses en ligne Accéder directement au contenu
Thèse Année : 2004

Topological study of the active sites and of the substrate specificities of human Cytochromes P450 2C9 and CYP2C8 using directed mutagenesis

Etude par mutagenèse dirigée de la topologie des sites actifs et des spécificités de substrats des cytochromes P450 2C9 et 2C8 humains

Résumé

The aim of this thesis has been to modify CYP2C9 and 2C8 at specific positions by directed mutagenesis in order to evaluate the influence of the mutated residues on specific substrate transformations and help to define their active site. Expression of the mutants was done in yeast (saccharomyces cervisiae) in vector V60. For CYP2C9 the mutant F114I show that the aromatic phenylalanine 114 is involved as a pi donnor to substrates and inhibitors like sulphafenazole. Also phenylalanine 476 is important in the substrate binding as shown by mutant F476I. For CYP 2C8 , a number of mutations have been done on positions Arg97, Ser100, Ser114, Phe201, Phe205, Arg241. Arg 97 is important for heme fixation. Ser100, Ser114, Phe201, Phe205, interact with the substrates. Arg241 is probably involved in the entrance channel of the substrate. The mutagenesis result were analysed in function of the published x-ray structures of CYP2C5 and CYP2C9 at the end of the thesis
Le but de ce travail a été de modifier par mutagénèse dirigée diverses positions des cytochromes P450 CYP2C9 et 2C8, afin de déterminer l'influence topologique es aminoacides mutés sur le devenir des substrats et l'interaction avec les inhibiteurs. Les P450 ont été exprimés dans la levure (vecteur V60). Pour le CYP2C9, la phenylalanine 114 est importante dans la fixation des substrats aromatique par le rle Pi donneur du phényl comme le montre le mutant F114I. De même la phenylalanine 476 a un rôle dans la fixation des substrats (F476I). Pour le CYP2C8 l'arginine 97 intervient dans la fixation de l'ème. Les Ser100, Ser114, Phe201, Phe205, tapissent le site actif de l'enzyme et l'arginine 241 est probablement situé dans le canal d'accès du substrat. Tous les résultats précédents ont été confrontés avec les structures cristallines des CYP2C5 et CYP2C9 publiés à la fin de la thèse.
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Dates et versions

tel-01413358 , version 1 (09-12-2016)
tel-01413358 , version 2 (12-12-2016)

Identifiants

  • HAL Id : tel-01413358 , version 2

Citer

Armelle Melet. Etude par mutagenèse dirigée de la topologie des sites actifs et des spécificités de substrats des cytochromes P450 2C9 et 2C8 humains. Biochimie, Biologie Moléculaire. Université Paris 5 Sorbonne Descartes, 2004. Français. ⟨NNT : ⟩. ⟨tel-01413358v2⟩
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