Functionnal and structural studies of soluble lectins from Burkholderia cenocepacia
Etudes structurales et fonctionnelles des lectines solubles de Burkholderia cenocepacia
Résumé
Opportunistic infection by pathogens such as Pseudomonas aeruginosa and Burkholderia
cenocepacia is the first cause of morbidity and mortality in cystic fibrosis patients. The
opportunistic pathogen Burkholderia cenocepacia contains three soluble carbohydratebinding
proteins, related to the fucose-binding lectin PA-IIL from Pseudomanas aeruginosa.
These lectins could play a role in early stage of infection through specific binding to epithelial
cells of hosts. They could also be involved in the building of biofilm that is responsible for
resistance to antibiotics. The thesis is focused on structure-function studies of two B.
cenocepacia lectins, BclA and BclB with the aim to correlate the data to the localisation and
function in the bacteria. Glycan array data associated with titration microcalorimetry allowed
to determine the specificity of the lectins and the affinity towards the best ligands.
Localisation studies demonstrate the presence of the lectins in the bacteria cytoplasm but also
on the outer membrane. Finally, crystal structures of lectin complexed with carbohydrate give
the molecular basis of the interaction.
La colonisation des poumons par des germes comme Pseudomonas aeruginosa et
Burkholderia cenocepacia représente la première cause de maladie et de mortalité chez les
patients atteints de la mucoviscidose. Quatre gènes de séquence apparentée à celui codant
pour la lectine soluble PA-IIL (LecB) de P. aeruginosa ont été identifiés dans le génome de B.
cenocepacia. Ces lectines pourraient être impliquées dans la reconnaissance des cellules
épithéliales de l’hôte au stade précoce de l’infection, ou encore dans la formation du biofilm
responsable de la résistance aux antibiotiques. Les travaux développés dans cette thèse portent
sur l’étude structurale et fonctionnelle de deux de ces lectines : BclA et BclB, ainsi que sur la
localisation et la fonction des protéines chez la bactérie. L’utilisation de glycan arrays
associée à la microcalorimétrie de titration ont permis de déterminer la spécificité des lectines
et leur affinité pour les meilleurs ligands. Les études de localisation ont montré ces lectines
cytoplasmiques sont aussi détectées à la surface de la membrane externe. Enfin, l’obtention de
cristaux de lectine complexée à son ligand permet de mieux comprendre l’interaction à
l’échelle moléculaire.
Origine : Fichiers produits par l'(les) auteur(s)