Lors de l’infection, les bactéries pathogènes déploient un arsenal de facteurs de virulence leur permettant d’envahir leurs organismes cibles. Si nombre de ces effecteurs bactériens ont été bien caractérisés, peu d’outils permettent une étude en temps réel de leur dynamique de sécrétion et de localisation au cours de l’infection. Les marqueurs existants, tels que la GFP (Green Fluorescent Protein) ne peuvent a priori pas passer les systèmes de sécrétion bactériens sous leur conformation active. L’utilisation de FAST (Fluorescence-Activating Shifting Tag) — une sonde dont la fluorescence résulte de la formation d’un complexe avec un ligand diffusant librement au travers des membranes biologiques — permet de s’affranchir de cet obstacle. Lors de ces travaux, j’ai montré que FAST peut être utilisé pour la visualisation d’effecteurs sécrétés par plusieurs systèmes de sécrétion bactériens (T3SS, T5SS et Sec). En mesurant la sécrétion de FAST, nous avons quantifié la dynamique de formation et de rupture des vacuoles d’internalisation occupées par Listeria monocytogenes. En recherchant la localisation de la LLO, l’un des principaux facteurs de virulence sécrétés par L. monocytogenes, j’ai identifié un compartiment dans lequel les bactéries peuvent se répliquer après l’invasion des cellules épithéliales, avant de coloniser le cytoplasme de l’hôte. En plus de valider un outil fluorescent permettant la localisation en temps réel de protéines bactériennes exportées par divers systèmes de sécrétion, cette étude complète le modèle du cycle intracellulaire de L. monocytogenes lors de l’infection de cellules épithéliales.