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Thèse Année : 2021

Cooperation Between Jak2 V617F and Srsf2 P95H Mutations in Hematopoïetic System

Coopération entre les mutations Jak2 V617F et Srsf2 P95Hdans le système hématopoïétique

Résumé

JAK2 V617F mutation is frequently identified in myeloproliferative neoplasms (MPN). Additional somatic variants are supposed to contribute to bone marrow fibrosis or acute myeloid leukemia evolution. One of these mutations affects SRSF2, a gene encoding a component of the splicing machinery. To investigate how Jak2 V617F and Srsf2 P95H mutations interact in the hematopoietic tissue, we generated conditional knock-in mice in which the two mutations were expressed upon the control of Scl gene. Our study shows that Srsf2 P95H mutation initially exhibits limited effect on Jak2 V617F polycythemia and thrombocytosis but induces a delay in myelofibrosis development and protect hematopoietic stem cell from exhaustion observed after serial transplantation in Jak2 V617F single mutant cells. We focused on megakaryocyte (MK), implied in fibrosis development and found that Srsf2P95H partially reversed MKabnormalities induced by Jak2 V617F (cell size, normalized ploidy and expression of c-Mpl). Analysis of c-Mpl/Jak2 signaling with mass cytometry revealed a slight reduced proportion of MK expressing high levels of P-Stat5 in case of Srsf2 P95H co-occurrence with Jak2 V617F while treatment with high dose of the thrombopoietin-mimetic romiplostim in mice transplanted with wild-type or Srsf2 P95H bone marrow cells confirms the negative impact of Srsf2 P95H on fibrosis development. Gene expression analysis on sorted MK confirms down-regulation of Jak/Stat signaling pathway induced by Srsf2 P95H and reveals that Srsf2 P95H mutation more frequently induces exon 14 skipping of Jak2 mRNA. These result was confirmed in granulocytes samples from patients with JAK2 V617F MPN with associated SRSF2 P95H mutation.
La mutation JAK2 V617F est fréquemment observée en cas de néoplasme myéloprolifératif (NMP). D’autres mutations somatiques peuvent être associées et sont corrélées au stade myélofibrotique ou à une évolution en leucémie aigüe. L’une de ces mutations touche le gène SRSF2, codant pour une protéine du complexe d’épissage. Pour étudier l’interaction entre les mutations Jak2 V617F et Srsf2 P95H dans le tissu hématopoïétique, nous avons généré un modèle murin knock-in conditionnel des deux mutations s’exprimant sous le contrôle du gène Scl. Notre étude montre que Srsf2 P95H limite peu le développement de la polyglobulie et de la thrombocytose induites par Jak2 V617F mais freine l’évolution vers une fibrose médullaire et protège les cellules souches hématopoïétiques de l’épuisement en transplantations sériées. L’étude des mégacaryocytes (MK), impliqués dans le processus fibrotique, montre que Srsf2 P95H induit une quasi-normalisation des anomalies induites par Jak2 V617F (taille, ploïdisation, expression de c-Mpl). L’analyse de la signalisation c-Mpl/Jak2 par cytométrie de masse révèle une discrète diminution de la proportion de MK exprimant de haut niveau de P-Stat5 en cas de mutation Srsf2 P95H associée à Jak2 V617F tandis que l’injection d’un agoniste de la thrombopoïetine à fortes doses confirme l’impact négatif de Srsf2 P95H sur le développement de la fibrose. L’étude de l’expression génique de MK triés confirme l’altération de la voie Jak/Stat induite par Srsf2 P95H et révèle que Srsf2 P95H induit plus fréquemment une perte de l’exon 14 (incluant la mutation V617F) de l’ARNm de Jak2. Ce résultat est confirmé sur des échantillons de granulocytes de patients atteints de NMP JAK2 V617F avec mutation SRSF2 P95H associée.
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Origine : Version validée par le jury (STAR)

Dates et versions

tel-03768302 , version 1 (03-09-2022)

Identifiants

  • HAL Id : tel-03768302 , version 1

Citer

Christophe Willekens. Coopération entre les mutations Jak2 V617F et Srsf2 P95Hdans le système hématopoïétique. Cancer. Université Paris-Saclay, 2021. Français. ⟨NNT : 2021UPASL076⟩. ⟨tel-03768302⟩
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