ROLE DE L'EXOENZYME S DE PSEUDOMONAS AERUGINOSA DANS LA VIRULENCE BACTERIENNE : ETUDE FONCTIONNELLE DU DOMAINE GAP ET DE SES CIBLES SUR LA REPONSE IMMUNITAIRE CHEZ DROSOPHILA MELANOGASTER - TEL - Thèses en ligne Accéder directement au contenu
Thèse Année : 2005

ROLE OF THE PSEUDOMONAS AERUGINOSA EXOENZYME S IN THE BACTERIAL VIRULENCE : FUNCTIONNAL STUDY OF THE GAP DOMAIN AND OF ITS TARGETS IN DROSOPHILA MELANOGASTER INNATE IMMUNITY

ROLE DE L'EXOENZYME S DE PSEUDOMONAS AERUGINOSA DANS LA VIRULENCE BACTERIENNE : ETUDE FONCTIONNELLE DU DOMAINE GAP ET DE SES CIBLES SUR LA REPONSE IMMUNITAIRE CHEZ DROSOPHILA MELANOGASTER

Résumé

The type III exoenzyme S toxin of Pseudomonas aeruginosa possesses a GAP domain (GTPase Activating Protein) (ExosGAP) inhibiting the Rho GTPases (Rho, Rac and Cdc42) and phagocytosis in Mammal cell lines. We have used a transgenesis approach in Drosophila melanogaster using a tissue-specific inducible expression system (UAS-Gal4) to express ExoSGAP. We have demonstrated that ExoSGAP targeted in vivo the Rho GTPases Rho, Rac1, Rac2 and Cdc42. The ExoSGAP expression affects fly resistance to infection by inhibiting phagocytosis of bacteria by plasmatocytes, a macrophage cell line, but has no effect on NF-kB signalling pathways. A genetic approach has allowed the identification of new ExoSGAP targets by looking for genes whose misexpression modifies the eye or wing phenotype induced by the toxin expression. We have identified several genes which can be implicated in JNK and NF-kB signalling pathways. All these results validate a new strategy to study type III toxins by transgenesis in Drosophila.In parallel, I have demonstrated GTPase Rac2 specificity in Drosophila resistance to infection. Rac2 participates notably in phagocytosis.
The works of Dr. H. Tricoire led to the identification of 180 genes whose misexpression modifies fly response to oxidative stress. We have tested 105 of these lines for their resistance to infections to study a possible correlation between the oxidative and infectious stress response. This screen allows to demonstrate the implication of a protein with a lectin domain called PSLR (Pseudomonas Sensitive Lectin Receptor) in fly immunity.
L'exoenzyme S, une toxine de type III, de Pseudomonas aeruginosa possède un domaine GAP (GTPase Activating Protein) (ExoSGAP) inhibant les Rho GTPases (Rho, Rac, Cdc42) et la phagocytose dans les cellules de Mammifères en culture. J'ai utilisé une approche de transgenèse chez Drosophila melanogaster en utilisant un système d'expression tissu-spécifique inductible (UAS-Gal4) afin d'exprimer ExoSGAP. Nous avons montré qu'ExoSGAP cible in vivo les Rho GTPases Rho, Rac1, Rac2 et Cdc42. ExoSGAP affecte la résistance des mouches aux infections en inhibant la phagocytose des bactéries par les plasmatocytes, des cellules de type macrophage, mais n'a pas d'effet sur les voies NF-kB. Une approche génétique a permis d'identifier de nouvelles cibles de la toxine, en recherchant des gènes dont la dérégulation modifie le phénotype d'œil ou d'aile induit par l'expression d'ExoSGAP. Nous avons identifié plusieurs gènes pouvant avoir un rôle dans les voies des JNK et NF-kB Ces résultats valident une stratégie d'étude des toxines de type III par transgenèse chez la drosophile.J'ai parallèlement montré la spécificité de la GTPase Rac2 dans la résistance des mouches aux infections bactériennes. Rac2 participe notamment à la phagocytose.
Les travaux du Dr. H. Tricoire ont permis d'identifier 180 gènes dont la dérégulation modifie la réponse des mouches à un stress oxydant. J'ai testé 105 de ces lignées pour leur résistance aux infections, afin d'étudier une corrélation possible entre la réponse aux stress oxydant et infectieux. Ce crible a permis de montrer l'implication d'une protéine à domaine lectine PSLR (Pseudomonas Sensitive Lectin Receptor) dans la réponse immunitaire de la drosophile.
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Dates et versions

tel-00088218 , version 1 (31-07-2006)

Identifiants

  • HAL Id : tel-00088218 , version 1

Citer

Amélie Avet-Rochex. ROLE DE L'EXOENZYME S DE PSEUDOMONAS AERUGINOSA DANS LA VIRULENCE BACTERIENNE : ETUDE FONCTIONNELLE DU DOMAINE GAP ET DE SES CIBLES SUR LA REPONSE IMMUNITAIRE CHEZ DROSOPHILA MELANOGASTER. Immunologie. Université Joseph-Fourier - Grenoble I, 2005. Français. ⟨NNT : ⟩. ⟨tel-00088218⟩

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