Etude des interactions entre les facteurs cytosoliques du complexe de la NADPH Oxydase - TEL - Thèses en ligne Accéder directement au contenu
Thèse Année : 2005

Study of the interactions between the cytosolic factors of the NADPH Oxidase complex

Etude des interactions entre les facteurs cytosoliques du complexe de la NADPH Oxydase

Sylvie Chenavas
  • Fonction : Auteur
  • PersonId : 883862

Résumé

During phagocytose of a micro-organism, the NADPH Oxidase complex of neutrophiles is activated. Reactive oxygen species are then produced and contribute to pathogen destruction. This complex comprises cytosolic factors (p67phox, p40phox, p47phox), a small G protein Rac and a flavocytochrome b558 composed of p22phox and gp91phox. Mutations within the genes encoding some of these proteins lead to a rare but serious disease termed chronic granulomatous disease (CGD). The formation of the ternary complex constituted by the cytosolic factors implies several SH3 domain/polyproline interactions and also an interaction PB1 domain interaction. We structurally characterized by Nuclear Magnetic Resonance the interaction between PB1 domains of p67phox and p40phox. We also studied the consequences of activation on the interactions involving p47phox C-terminal polyproline motif and its SH3 domain partners. Thus, we combined the analysis of the structures of p40phox SH3 domain and p67phox C-terminal SH3 domain, in complex with p47phox C-terminal polyproline, with our affinity measures between these partners at various stages of activation. These data were obtained by intrinsic fluorescence of tryptophan present within SH3 domains.
Lors de la phagocytose d'un micro-organisme, le complexe de la NADPH Oxydase des neutrophiles est activé. Il permet alors la production d'espèces réactives de l'oxygène qui contribuent à la destruction du pathogène. Ce complexe est constitué de facteurs cytosoliques (p67phox, p40phox, p47phox), d'une petite protéine G Rac et du flavocytochrome b558 membranaire, lui-même composé de p22phox et gp91phox. Des mutations dans les gènes codant pour certaines de ces protéines conduisent à une maladie génétique rare mais grave!: la granulomatose septique chronique (CGD). Au sein du complexe ternaire formé par les facteurs cytosoliques, il existe des interactions de type domaine SH3/motif polyproline et une interaction entre domaines PB1. Par Résonance Magnétique Nucléaire, nous avons caractérisé d'un point de vue structural l'interaction entre les domaines PB1 de p67phox et p40phox. Nous avons également étudié les conséquences de l'activation sur les interactions entre le motif polyproline C-terminal de p47phox et ses domaines SH3 partenaires. Ainsi, nous avons combiné l'analyse des structures des domaines SH3 de p40phox et SH3 C-terminal de p67phox, en complexe avec le polyproline C-terminal de p47phox, avec nos mesures d'affinité entre ces partenaires à différents stades de l'activation. Ces données ont été obtenues par fluorescence intrinsèque du tryptophane présent au sein des domaines SH3.
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Dates et versions

tel-00540636 , version 1 (28-11-2010)

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  • HAL Id : tel-00540636 , version 1

Citer

Sylvie Chenavas. Etude des interactions entre les facteurs cytosoliques du complexe de la NADPH Oxydase. Biochimie [q-bio.BM]. Université Joseph-Fourier - Grenoble I, 2005. Français. ⟨NNT : ⟩. ⟨tel-00540636⟩
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