Imaging the assembly of the phagocyte NADPH oxidase in live cells -a quantitative FRET-FLIM approach - TEL - Thèses en ligne Accéder directement au contenu
Thèse Année : 2016

Imaging the assembly of the phagocyte NADPH oxidase in live cells -a quantitative FRET-FLIM approach

Suivi de l'assemblage de la NADPH oxydase en imagerie -FRET-FLIM quantitatif

Résumé

The NADPH oxidase is a major enzyme of the immune system and any dysfunctions are associated with diseases. It is composed of five subunits, which assemble at the cell membrane upon activation, leading to the production of superoxide anion. The subunits were tagged with GFP variants in order to characterize the interactions between the three cytosolic subunits qualitatively and quantitatively in live cells. The non-invasive fluorescence imaging based techniques used enable the determination of the fraction of interacting subunits, an estimation of the strength of the interaction (Kd), and give insight in the structural organisation of the interacting proteins. The outcomes allow us for the first time to design a 3D-model of the cytosolic complex covering the in vitro as well as the live cell situation. Additionally, the small bound fraction of cytosolic subunits found here may raise new ideas on the regulation of this vital enzyme.
La NADPH oxydase est une enzyme majeure du système immunitaire et ses disfonctionnements sont associés à des pathologies. Elle est composée de 5 sous-unités qui s’assemblent à la membrane cellulaire au moment de l’activation pour conduire à la production d’anions superoxydes. Les sous-unités ont été marquées avec des variants de la GFP pour caractériser qualitativement et quantitativement les interactions entre les 3 sous-unités cytosoliques en cellules vivantes. Des techniques non invasives d’imageries de fluorescence ont été utilisées pour déterminer la fraction des sous-unités en interactions, estimer l’intensité de ces interactions (Kd) et préciser leur géométrie. Les résultats obtenus nous ont permis de proposer pour la première fois un modèle tridimensionnel du complexe cytosolique compatible avec les données in vitro et en cellules. De plus, la faible proportion de protéines associées entre elles, mesurée en cellules, suggère de nouveaux modes de régulation de cette enzyme.
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Dates et versions

tel-01623408 , version 1 (30-10-2017)

Identifiants

  • HAL Id : tel-01623408 , version 1

Citer

Cornelia Susanne Ziegler. Imaging the assembly of the phagocyte NADPH oxidase in live cells -a quantitative FRET-FLIM approach. Biophysics. Université Paris Saclay, 2016. English. ⟨NNT : ⟩. ⟨tel-01623408⟩

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