Ingénierie d'un outil basé sur une GFP fragmentée pour l'étude des protéines multi-localisées chez les eucaryotes - TEL - Thèses en ligne Accéder directement au contenu
Thèse Année : 2017

Engineering a Split-GFP based tool to study multilocalized protein in Eukaryotes

Ingénierie d'un outil basé sur une GFP fragmentée pour l'étude des protéines multi-localisées chez les eucaryotes

Résumé

Aminoacyl-tRNA synthetases catalyze aminoacyl-tRNA formation, required for protein synthesis but can also associate into multi-synthetase complexes (MSC). In S. cerevisiae, the AME complex contains glutamyl- and methionyl-tRNA synthetases bound to the anchor protein Arc1 and is responsible for the coordination of nuclear and mitochondrial genome expression. The three MSC partners are multi-localized and present simultaneously in several compartments. The detection of the organellar pools of these multilocalized proteins in vivo is difficult, since they are mainly cytosolic. Therefore, we engineered a split-GFP based localization tool that allows us to specifically visualize organellar fractions of multi-localized proteins. To do so, GFP was split into two parts: β1-10, restricted to a subcellular compartment and β11, fused to the protein of interest. This tool allowed us to study relocalization of cytosolic proteins and characterize targeting signals.
Les aminoacyl-ARNt synthétases catalysent la formation des aminoacyl-ARNt, utilisés lors de la synthèse protéique et peuvent également former des complexes multi-synthétasiques (MSC). Chez S. cerevisiae, le complexe AME associe les glutamyl- et méthionyl-ARNt synthétases à la protéine d’ancrage Arc1 et joue un rôle primordial dans la coordination de l’expression des génomes nucléaire et mitochondrial. Tous les composants de ce MSC sont multi-localisés et assurent des fonctions essentielles dans d’autres compartiments. Pour étudier ces localisations multiples, nous avons élaboré un outil, basé sur la Split-GFP, qui nous permet de visualiser spécifiquement la fraction organellaire d’une protéine multi-localisée. Pour cela, la GFP a été séparée en deux fragments : i) β1-10, restreint à un compartiment subcellulaire et ii) β11, fusionné aux protéines d’intérêts. Cet outil nous a permis d’étudier diverses relocalisations, ainsi que de délimiter des signaux d’import.
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Origine Version validée par le jury (STAR)
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Dates et versions

tel-02003385 , version 1 (01-02-2019)

Identifiants

  • HAL Id : tel-02003385 , version 1

Citer

Gaëtan Bader. Ingénierie d'un outil basé sur une GFP fragmentée pour l'étude des protéines multi-localisées chez les eucaryotes. Génomique, Transcriptomique et Protéomique [q-bio.GN]. Université de Strasbourg, 2017. Français. ⟨NNT : 2017STRAJ116⟩. ⟨tel-02003385⟩
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