Novel electrokinetic and analytical approaches for isolation and detection of extracellular vesicles
Nouvelles approches électrocinétiques et analytiques pour l'isolement et la détection des vésicules extracellulaires
Résumé
Extracellular vesicles (EVs) are important intercellular messengers that may be exploited as prognostic or diagnostic biomarkers. However, owing to technical limitations in purifying and assessing EV subpopulations, knowledge on individual EVs is still in its infancy. The goal of the thesis is therefore to develop novel analytical approaches for EVs isolation and detection, and analysis of internal and targeted proteins. First, we present a new capillary electrophoresis (CE), method coupled with laser-induced fluorescent (LIF) detection for identification and quantification of EVs after their purification. Then, Taylor dispersion analysis (TDA) was investigated to determine the size of isolated EVs. Finally, we present a novel approach for the isolation of EVs using polyethylene glycol (PEG) to precipitate EVs on the surface of magnetic beads. To improve the performance, we further translated this method into a droplet microfluidic protocol using a purpose-made droplet platform.
Les vésicules extracellulaires (EVs) sont d'importants messagers intercellulaires qui peuvent être exploités comme biomarqueurs pronostiques ou diagnostiques. Cependant, isoler, enrichir et caractériser les EVs à partir de fluides biologiques reste un défi. L'objectif de la thèse est de développer de nouvelles approches analytiques pour l'isolement et la détection des EVs, et l'analyse de protéines internes. Dans un premier temps, nous présentons une nouvelle méthode d'électrophorèse capillaire (CE), couplée à une détection fluorescente induite par laser (LIF) pour l'identification et la quantification des EVs. Ensuite, l'analyse de dispersion de Taylor (TDA) a été étudiée pour déterminer la taille des EVs. Enfin, nous présentons une nouvelle approche pour l'isolement des EVs à l'aide de polyéthylène glycol (PEG) pour précipiter les EVs à la surface de billes magnétiques. Pour améliorer les performances, nous avons transféré cette méthode dans un système microfluidique de gouttes.
| Origine | Version validée par le jury (STAR) |
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