Analyse des réponses lymphocytaires B et T spécifiques de l'antigène des patients atteints de pemphigus et traités par rituximab. - TEL - Thèses en ligne Accéder directement au contenu
Thèse Année : 2021

Αnalysis of antigen-specific Β and T lymphοcytes response in pemphigus patients treated with rituximab

Analyse des réponses lymphocytaires B et T spécifiques de l'antigène des patients atteints de pemphigus et traités par rituximab.

Résumé

The first-line treatment for moderate to severe forms of pemphigus vulgaris (PV) is RTX, a chimeric anti-CD20 monoclonal Ac, combined with short-term oral corticosteroid therapy. Despite the formidable efficacy of this combination, a significant relapse rate persists, mainly in the first year.First, we determined prognostic factors for relapse in patients treated with RTX. The presence of at least one of the following criteria: PDAI ≥ 45 at diagnosis and/or the presence of anti-DSG1 Ac ≥ 20IU/mL and/or anti-DSG3 Ac ≥ 130IU/mL between months 3 and 6 predicted short-term relapse with a PPV of 50% and an NPV of 94%.Next, longitudinal transcriptomic analysis of 33 genes of interest showed that autoreactive B cells initially exhibited a proinflammatory profile compared with nonautoreactive B cells, marked by overexpression of 3 genes encoding the cytokines IL-1β, IL-12p35, and IL-23p19 as well as the gene for IRF5. Surprisingly, rituximab induced few change in gene expression, with the exception of IL-1β and CD27 both "down-regulated." The decreased expression of the memory marker CD27 was confirmed by cytometry, and correlated with clinical improvement.Subsequently, we studied the cytokine BAFF and its receptor BAFF-R. We showed that basal serum BAFF levels were higher in pemphigus patients than in healthy donors and especially in relapsing patients. RTX resulted in increased BAFF levels associated with decreased transcriptomic and cytometric expression of BAFF-R in both non-autoreactive and autoreactive B cells. CS allowed a transient decrease in BAFF followed by a re-ascension upon decay below a threshold of 20mg/d, with no change in BAFF-R expression. Thus, the activation of autoreactive B cells at the onset of pemphigus could be related to the presence of high serum BAFF levels and the decrease in BAFF-R expression would delay the return of memory B cells. Conversely, incomplete B-cell depletion and persistent BAFF-R expression associated with BAFF re-ascension could explain relapses in patients treated with CS.In another work, we studied the distribution and evolution of anti-DSG3 IgG subclasses in patients with PV and correlated their distribution and pathogenicity in vitro with the clinical course of the patients, before and after CS alone or associated with RTX. We confirmed the majority presence of anti-DSG3 IgG4 in patients, with an association with another subclass in 1/4 of the cases. RTX reduced the diversity of subclasses. The presence of ≥2 anti-DSG3 IgG subclasses at diagnosis was associated with an increased risk of relapse. Our pathogenicity tests emphasized the importance of anti-DSG3 IgG4 concentration, mainly when it was the only isotype found. On the contrary, in patients with both IgG3 and IgG4 at diagnosis and only IgG4 in remission, purified IgG3 was able to induce acantholysis while purified IgG3 residues were not.Finally, we studied the impact of RTX on the frequency, polarization and activation of DSG3-specific follicular helper (Tfh) and regulatory (Tfr) T cells. At diagnosis, we showed that the phenotypes of the patients' autoreactive and non-autoreactive Tfh were different with a predominance of Tfh1* and Tfh17 phenotypes in the autoreactive Tfh and, on the contrary, an underrepresented Tfh2 phenotype. RTX had no effect on Tfh polarization. We then demonstrated the emergence of an Ag-specific Tfr population after RTX use. Furthermore, these Tfr significantly overexpressed the surface activation markers PD1, ICOS and CD25.
Le traitement de 1ère intention des formes modérée à sévère de pemphigus vulgaire (PV) est le RTX, un Ac monoclonal chimérique anti-CD20, associé à une corticothérapie orale de courte durée. Malgré l’efficacité redoutable de cette association, un taux de rechutes important persiste, principalement la 1ère année.D’abord, nous avons déterminé des facteurs pronostiques de rechute chez les patients traités par RTX. La présence d’au moins un des critères suivants : PDAI ≥ 45 au diagnostic et/ou la présence d’Ac anti-DSG1 ≥ 20UI/mL et/ou anti-DSG3 ≥ 130UI/mL entre le 3ème et le 6ème mois permettait de prédire une rechute à court terme avec une VPP de 50% et une VPN de 94%.Ensuite, une analyse transcriptomique longitudinale sur 33 gènes d’intérêt a montré que les LB autoréactifs présentaient initialement un profil pro-inflammatoire par rapport aux LB non auto-réactifs, marquée par la surexpression de 3 gènes codant pour les cytokines IL-1β, IL-12p35 et IL-23p19 ainsi que pour le gène de l’IRF5. Étonnamment, le rituximab n’induisait que peu de changement d’expression génique, à l'exception de l’IL-1β et du CD27 tous deux « down-régulés ». La diminution d’expression du marqueur mémoire CD27 était confirmée en cytométrie, et corrélée à l’amélioration clinique.Par la suite, nous avons étudié la cytokine BAFF et son récepteur BAFF-R. Nous avons montré que les taux sériques basaux de BAFF étaient plus élevés chez les patients atteints de pemphigus que chez les donneurs sains et plus particulièrement chez les rechuteurs. Le rituximab entraînait une augmentation des taux de BAFF associée à une diminution d’expression transcriptomique et cytométrique de BAFF-R à la fois sur les LB non-autoréactifs et autoréactifs. La CS permettait une diminution transitoire de BAFF suivie d’une ré-ascension lors de la décroissance sous un seuil de 20mg/j, sans modification de l’expression de BAFF-R. Ainsi, l'activation des LB autoréactifs au début du pemphigus pourrait être liée à la présence de taux sériques élevés de BAFF et la diminution de l'expression du BAFF-R retarderait le retour de cellules B mémoires. Inversement, la déplétion incomplète des cellules B et l'expression persistante de BAFF-R associées à une ré ascension de BAFF pourraient expliquer les rechutes chez les patients traités par CS.Dans un autre travail, nous avons étudié la distribution et l'évolution des sous-classes d'IgG anti-DSG3 chez les patients atteints de PV et corrélé leur distribution et leur pathogénicité in vitro avec l'évolution clinique des patients, avant et après CS seule ou associée au RTX. Nous avons confirmé la présence majoritaire d’IgG4 anti-DSG3 chez les patients, avec une association à une autre sous-classe dans 1/4 des cas. Le RTX permettait de réduire la diversité des sous-classes. La présence de ≥2 sous-classes d'IgG anti-DSG3 au diagnostic était liée à un risque accru de rechute. Nos tests de pathogénicité ont souligné l’importance de la concentration en IgG4 anti-DSG3, principalement lorsqu’il s’agit du seul isotype retrouvé. Au contraire, dans le cas de patients présentant à la fois des IgG3 et des IgG4 au diagnostic et uniquement des IgG4 en rémission, les IgG3 purifiées ont été capables d'induire une acantholyse alors que les résidus purifiés d'IgG3 ne l'étaient pas. nfin, nous avons étudié l’impact du RTX sur la fréquence, la polarisation et l’activation des LT folliculaires helper (Tfh) et régulateurs (Tfr) spécifiques de la DSG3. Au diagnostic, nous avons montré que les phénotypes des Tfh autoréactifs et non autoréactifs des patients étaient différents avec une prédominance des phénotypes Tfh1* et Tfh17 dans les Tfh autoréactifs et, au contraire, un phénotype Tfh2 sous-représenté. Le RTX n'avait aucun effet sur la polarisation des Tfh. Nous avons ensuite démontré l'émergence d'une population Tfr spécifique de l'Ag après l'utilisation de RTX. De plus, ces Tfr surexprimaient significativement les marqueurs d'activation de surface PD1, ICOS et CD25.
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  • HAL Id : tel-03824382 , version 1

Citer

Vivien Hébert. Analyse des réponses lymphocytaires B et T spécifiques de l'antigène des patients atteints de pemphigus et traités par rituximab.. Sciences agricoles. Normandie Université, 2021. Français. ⟨NNT : 2021NORMR077⟩. ⟨tel-03824382⟩
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