Rôle du récepteur P2X7 dans des modèles murins de sclérose en plaques et évaluation de son potentiel en tant que nouvelle cible thérapeutique - TEL - Thèses en ligne Accéder directement au contenu
Thèse Année : 2023

Modulation of P2X7 receptor activity in experimental autoimmune encephalomyelitis models.

Rôle du récepteur P2X7 dans des modèles murins de sclérose en plaques et évaluation de son potentiel en tant que nouvelle cible thérapeutique

Résumé

The P2X7 receptor (P2RX7) is an ATP-gated cation channel receptor, present in particular onmonocytes/macrophages, T lymphocytes (lyT) CD4/Tregs and microglia. It plays an important roleduring inflammation mainly through the activation of the NLRP3 inflammasome, the induction of proinflammatorycytokine production (IL-1β and IL-18), the induction of cell death, and the modulation oflyT differentiation. The objective of this thesis was to better understand its role in the pathophysiologyof the model of experimental autoimmune encephalitis (EAE, an MS animal model) by using anAAVnano technology developed in our laboratory. This technology consists of an AAV vector encodingspecific nanobodies (Ncs) binding P2RX7, and with antagonist (13A7-Fc) or potentiating (14D5-dimHLE)activities, that had been previously selected and optimized. This technology was validated by acuteand chronic models of colitis induced by DSS, where blocking P2RX7 reduced the clinical score while,conversely, potentiating it increased this score. We have also shown that a single intramuscularinjection of blocking AAVnano allowed long-lasting production of these Ncs (at least 120 days), bindingand blocking of P2RX7 at the periphery and at the level of the CNS, in a similar way to AAVnanointracerebral injection. In comparison, recombinant Ncs administered through intravenous injection,where only able to cross the blood-brain barrier (BBB) when given at high dose. This result implies thatpassage of Ncs through the BBB is facilitated by the continuous production achieved by AAVnanotechnology. This feature may be exploited for the delivery of therapeutic antibodies into the CNS. InEAE, AAVnano vectors encoding the antagonist Ncs were injected either 3 weeks before or 4 days aftermice immunization. Our data showed that the inhibition of P2RX7 prior to EAE induction led to anexacerbation of the clinical signs of EAE, and on the contrary, to an improvement of the disease whenthe AAVnano were injected a posteriori. This project offers new perspectives on the therapeuticinterest of anti-P2RX7 Nbs during EAE and potentially for its application to MS and other relateddiseases.
Le récepteur P2X7 (P2RX7) est un récepteur canal cationique dépendant de l’ATP, présent notammentsur les monocytes/macrophages, les lymphocytes T (lyT) CD4/Tregs et la microglie. Il a un rôleimportant dans l'inflammation par l’activation de : l’inflammasome NLRP3, la production de cytokinespro-inflammatoires (IL-1β et IL-18) et la mort cellulaire ; il module également la différenciation des lyT.L’objectif de cette thèse était de mieux comprendre son rôle dans la physiopathologie du modèle del’encéphalite expérimentale auto-immune (EAE, un modèle animal de sclérose en plaques, SEP) grâceà une technologie AAVnano développée dans notre laboratoire. Cette méthode consiste en un vecteurAAV codant pour des nanocorps (Ncs) spécifiques de P2RX7, avec une activité soit antagoniste (13A7-Fc) ou potentialisatrice (14D5-dimHLE) du récepteur, qui ont été précédemment sélectionnés etoptimisés. L’efficacité de cette technologie a été validée dans le cadre de modèles aigüe et chroniquede colite par DSS, où bloquer P2RX7 permettait de diminuer le score clinique alors qu'à l’inverse, lepotentialiser exacerbait la maladie. Nous avons également montré qu’une seule injectionintramusculaire d’AAVnano codant pour le Ncs antagoniste du P2RX7, permettait leur productiondurable (au moins 120 jours), une fixation et un blocage de P2RX7 à la périphérie et au niveau du SNC,et ce, de manière équivalente à une injection intracérébrale. En comparaison avec une administrationdes AAVnano, lorsque les Ncs recombinants étaient directement injectés par voie intraveineuse, uneforte dose était nécessaire pour traverser la barrière hématoencéphalique (BHE). Ce résultat impliqueque le passage du Ncs à travers la BHE est facilité par la production continue obtenue par la technologieAAVnano, qui pourrait être utile pour délivrer des anticorps thérapeutiques dans le SNC. Dans l'EAE,les vecteurs AAVnano codant pour le Ncs antagonistes du P2RX7 ont été injectés soit 3 semaines avantl'induction de l'EAE, soit 4 jours après l'EAE. Nos données ont montré que l'inhibition préalable deP2RX7 entraînait une exacerbation des signes cliniques de l'EAE, et au contraire, une amélioration dela maladie était observée lorsque les AAVnano étaient injectés à postériori. Ce projet ouvre denouvelles perspectives pour évaluer l'intérêt thérapeutique des Nbs anti-P2RX7 lors de l'EAE etpotentiellement pour son application dans la SEP et d'autres maladies associées.
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Origine : Version validée par le jury (STAR)

Dates et versions

tel-04439538 , version 1 (05-02-2024)

Identifiants

  • HAL Id : tel-04439538 , version 1

Citer

Charlotte Guillou. Rôle du récepteur P2X7 dans des modèles murins de sclérose en plaques et évaluation de son potentiel en tant que nouvelle cible thérapeutique. Médecine humaine et pathologie. Normandie Université, 2023. Français. ⟨NNT : 2023NORMR073⟩. ⟨tel-04439538⟩
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