La paroi bactérienne est un réseau tridimensionnel de sucres et de peptides qui entoure la cellule. Elle confère à la cellule une forme adaptée sa niche écologique, et la protège contre les contraintes mécaniques exercées par la pression de turgescence interne. Chez les bactéries à Gram positif tel que le pathogène humain opportuniste Streptococcus pneumoniae, la paroi cellulaire est composée de peptidoglycane (PG) et d'acides teichoïques (ATs). Le PG est une entité commune aux bactéries. Il s'agit d'une structure en forme de maille constituée de chaînes de glycanes réticulées par de courts peptides. Le PG résulte de l'activité de deux complexes protéiques principaux, appelées les machineries morphogénétiques. Le divisome synthétise le PG septal, qui forme une paroi transversale divisant la cellule mère en deux cellules filles, tandis que l'élongasome synthétise le PG périphérique sur le bord externe du septum, entraînant l'allongement de la cellule. La structure, la fonction, la localisation, les interactions et les relations génétiques des composants de chacune des machineries ont été largement étudiées depuis des décennies. Néanmoins, la dynamique et la régulation de l'assemblage du PG sont encore peu comprises. Les ATs, quant à eux, sont des glycopolymères que l'on trouve uniquement chez les bactéries à Gram positif. Leur structure et leur composition diffèrent selon l'espèce bactérienne. Les connaissances sont beaucoup plus limitées pour les ATs, dont la dynamique d'assemblage et la coordination avec la synthèse du PG restent à élucider.La microscopie de fluorescence est une méthode de choix pour étudier la synthèse de la paroi cellulaire. Cependant, la microscopie à fluorescence conventionnelle souffre d'une limite de résolution d’environ 200 nm, ce qui représente un cinquième de la taille des cellules de pneumocoque. De plus, la synthèse des ATs et du PG chez les bactéries de forme ovoïde telle que S. pneumoniae (ovocoques), se produit dans une région annulaire dont les dimensions sont proches de cette limite de résolution. Afin d’étudier l'assemblage de la paroi cellulaire à l’échelle du nanomètre, nous avons développé une approche qui couple un marquage métabolique, utilisant la chimie bioorthogonale, et la microscopie de fluorescence à haute résolution (dSTORM), qui peut atteindre 20 nm de résolution. L'observation en dSTORM de PG marqué a révélé des caractéristiques spatio-temporelles jamais décrites jusqu'à présent. La combinaison de ces données avec une simulation in silico nous a conduit à proposer un modèle actualisé de la dynamique de synthèse du PG chez le pneumocoque. Dans notre modèle, le PG septal est synthétisé en amont du PG périphérique, qui est inséré dans le PG septal après clivage par les hydrolases du septum. Afin de tester notre modèle et d'étudier le mécanisme de régulation de la synthèse du PG, nous avons étudié l'effet de l'inactivation de l’hydrolase principale du septum, PcsB, et de deux principales protéines régulatrices, DivIVA et GpsB, qui promeuvent respectivement l'élongation et la septation de la cellule. De plus, des données préliminaires du marquage des ATs imagé en dSTORM montrent que la synthèse des ATs diffère dans le temps et dans l’espace de celle du PG. Pour tester cette idée, un protocole d'imagerie dSTORM en deux-couleur est en cours d'optimisation.